CÁNCER COLORECTAL
Diagnóstico de HNPCC
Los tumores colorrectales con inestabilidad de microsatélites (MSI-H) tienen un fenotipo histopatológico característico e independiente de la presentación clínica, siendo las formas hereditarias morfológicamente indistinguibles de las esporádicas. Aun así, sólo el 10% de los pacientes con cáncer colorrectal MSI-H es susceptible de neoplasia hereditaria, y el despistaje basado en la historia clínica (criterios de Amsterdam o de Bethesda) no siempre permite su identificación. El gen BRAF codifica una serina/treonina cinasa que, inducida por factores de crecimiento, activa la señalización de RAS/RAF/MEK/ERK implicada en la proliferación celular. La alteración más frecuente de BRAF, la mutación V600E, induce la activación constitutiva de la vía MAPK, facilitando la evasión de la apoptosis. Esta mutación se asocia a la inactivación transcripcional del gen MLH1 por hipermetilación de su promotor, pero no a la mutación en línea germinal de éste. Así, la mutación BRAF-V600E se perfila como marcador del carácter esporádico del carcinoma colorrectal MSI-H, con independencia de los criterios clínicos. La estrategia de incorporar la detección de BRAF-V600E al estudio rutinario del carcinoma colorrectal MSI-H es útil para el despistaje de HNPCC, y reduce significativamente el número de casos susceptibles de estudio de los genes MMR.
Tratamiento
Las opciones de tratamiento del carcinoma colorrectal metastásico se han visto expandidas desde la aparición de anticuerpos monoclonales específicos para los receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) como panitumumab y cetuximab. Los EGFR activan diferentes vías de transducción de señal, como la vía MAPK y la vía PI3K-Akt entre otras, que controlan directamente la división celular, la diferenciación y la apoptosis. Las mutaciones en diferentes mediadores de estas vías (KRAS, BRAF, PIK3CA, PTEN) pueden condicionar su activación constitutiva e impedir el efecto el bloqueo del receptor por los anticuerpos monoclonales. Esta resistencia, demostrada para las mutaciones de KRAS, también se ha reportado en diversos trabajos para las mutaciones de BRAF y PIK3CA.
Descripción de la técnica:
Detección de deleciones, inserciones, inversiones y sustituciones en targeted-regions y hotspot en 22 genes (EGFR, ALK, ERBB2, ERBB4, FGFR1, FGFR2, FGFR3, MET, DDR2, KRAS, PIK3CA, BRAF, AKT1, PTEN, NRAS, MAP2K1, STK11, NOTCH1, CTNNB1, SMAD4, FBXW7 y TP53) mediante secuenciación masiva.
Amplificación de librerías de DNA mediante PCR con el kit Oncomine Solid Tumour DNA. Cuantificación de las librerías con Ion Library TaqMan Quantitation Kit. PCR en emulsión, enriquecimiento de ISPs y carga del chip en Ion Chef System. Secuenciación masiva en Ion Personal Genome Machine (PGM) System. Análisis con IonReporter 5.2. ThermoFisher Scientific software.
Tipo de muestra: Tejido tumoral en parafina.